液相色谱峰的保留时间不重现分为两种情况：一是保留时间单方向的漂移，即保留时间提前或延后；二是保留时间无规律的波动，即保留时间忽前忽后。保留时间漂移的原因大概率是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。下面来逐一分析主要的影响因素及如何改善。

1、色谱柱平衡不够。

若发生保留时间漂移，需要考虑流动相是否已使色谱柱达到充分的平衡。一般情况下，流动相平衡色谱柱需要10-20个柱体积；但如果流动相中有使用弱酸、弱碱、缓冲盐和离子对试剂，或者固定相为正相硅胶等，则需要更长的时间来平衡色谱柱。

2、色谱柱污染或受损。

这时也可能会导致保留时间的漂移，需要同时观察色谱峰型、柱效、压力的变化情况，推测色谱柱是否被污染。可以根据具体的测试条件来选择适当的溶剂进行色谱柱的冲洗，或更换新的色谱柱。为了延长色谱柱的使用寿命，增加保护柱是非常有效的方法。

3、柱温改变。

确认柱温的准确性，柱温的变化也会导致保留时间的变化。

4、流动相改变。

流动相中某种试剂的挥发，流动相中不同试剂的比例配制有误，也会导致保留时间的变化，需要确认流动相是否新鲜与正确。

5、流速改变。

观察柱前压力，如果压力不稳定或者偏离正常值，可能是泵流速不准确或者有气泡产生，出现保留时间的不稳定，需要保证仪器流速的准确性与稳定性。

6、疏水坍塌。
当小孔径和端基封口良好的反相色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失、样品保留明显降低或完全不保留，此现象称为疏水坍塌。

液相色谱峰的保留时间不重现的原因分析及改善方法

（一）保留时间变化    

①柱温变化--柱恒温    
②等度与梯度间未能充分平衡--至少用10倍柱体积的流动相平衡柱    
③缓冲液容量不够--用>25mmol/L的缓冲液    
④柱污染--每天冲洗柱    
⑤柱内条件变化--稳定进样条件,调节流动相    
⑥柱快达到寿命--采用保护柱

（二）保留时间缩短
①流速增加--检查泵,重新设定流速
②样品超载--降低样品量
③键合相流失--流动相PH值保持在3~7.5;检查柱的方向
④流动相组成变化--防止流动相蒸发或沉淀
⑤温度增加--柱恒温

　　
（三） 保留时间延长
①流速下降--管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
②硅胶柱上活性点变化--用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
③键合相流失--流动相PH值保持在3~7.5;检查柱的方向
④流动相组成变化--防止流动相蒸发或沉淀
⑤温度降低--柱恒温

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